Plasmide Double Nickase (h) HMG-I/HMG-Y: sc-402396-NIC

HMGA1 code pour les protéines architecturales associées à la chromatine HMG-I et HMG-Y, qui se lient à des séquences d’ADN riches en AT afin de moduler l’organisation des nucléosomes et la structure de la chromatine à un niveau supérieur. En facilitant l’assemblage de l’enhanceosome et en modifiant la topologie de l’ADN, HMGA1 influence des programmes transcriptionnels qui régissent la progression du cycle cellulaire, la différenciation et la signalisation en réponse au stress, y compris des voies impliquées dans la régulation des gènes inflammatoires. Une expression dérégulée de HMGA1 et une occupation anormale de la chromatine ont été associées à des altérations de la prolifération et de la stabilité du génome dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud clé dans les études sur le remodelage oncogénique des programmes transcriptionnels. Dans les cellules humaines, HMGA1 est également impliqué dans la régulation du timing de réplication et des réponses aux dommages de l’ADN via ses effets sur l’accessibilité de la chromatine.

HMG-I/HMG-Y Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HMGA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HMGA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HMGA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HMGA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.