Plasmide CRISPR/Cas9 KO HMG-3/HMGB3 (m): sc-420875

Présentation

Hmgb3 code la protéine de type « high mobility group box » HMGB3 (HMG-3), un facteur non histonique associé à la chromatine qui se lie à l’ADN et le courbe afin de moduler l’architecture des nucléosomes et l’accessibilité du génome. HMGB3 participe à la régulation de programmes transcriptionnels, de la réplication et de la réparation de l’ADN, ainsi qu’à la dynamique de la chromatine à plus haut niveau d’organisation, influençant ainsi la progression du cycle cellulaire et la différenciation spécifique des lignages. Par ses rôles dans le remodelage de la chromatine et les processus répondant aux dommages de l’ADN, une activité altérée de HMGB3 a été associée à une prolifération dérégulée et à des réseaux d’expression génique hématopoïétiques et développementaux aberrants. Dans les systèmes murins, Hmgb3 est fréquemment étudié pour disséquer le contrôle épigénétique des états de cellules souches/progénitrices et les conséquences moléculaires des perturbations de la chromatine.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HMG-3/HMGB3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hmgb3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hmgb3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hmgb3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HMG-3/HMGB3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hmgb3 pour l'étude de la signalisation de HMG-3/HMGB3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hmgb3 essentiels à la fonction de HMG-3/HMGB3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hmgb3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HMG-3/HMGB3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HMG-3/HMGB3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hmgb3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HMG-3/HMGB3 plasmide HDR (m) et le HMG-3/HMGB3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hmgb3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hmgb3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.