Plasmide Double Nickase (h) HMG-1/HMGB1: sc-400735-NIC

HMGB1 (HMG-1) code une protéine de liaison à l’ADN, hautement conservée et associée à la chromatine, qui courbe l’ADN et organise des complexes nucléoprotéiques, influençant la transcription, la réplication, la recombinaison et la réparation de l’ADN. Dans le noyau, HMGB1 participe à des voies de maintien de la stabilité génomique, notamment la réparation par excision de base et les réponses aux cassures double brin, tandis que sa libération extracellulaire peut agir comme un motif moléculaire associé aux dommages (DAMP) modulant la signalisation de l’immunité innée. Via des interactions avec des récepteurs tels que RAGE et les TLR, HMGB1 fait le lien entre le stress cellulaire et des programmes inflammatoires qui façonnent les microenvironnements tumoraux et les réponses tissulaires aux lésions. Une activité et une localisation dérégulées de HMGB1 ont été associées à la biologie des cancers, à l’auto-immunité et aux pathologies inflammatoires, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour les études de dynamique de la chromatine et d’immunométabolisme.

HMG-1/HMGB1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HMGB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HMGB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HMGB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HMGB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.