Plasmide CRISPR d'Activation (m) HMG-1/HMGB1: sc-420871-ACT

Hmgb1 code HMG-1/HMGB1, une protéine de la chromatine non histone très abondante qui se lie à l’ADN et le courbe afin de réguler la dynamique des nucléosomes, la transcription, la réplication et la réparation de l’ADN. Dans le noyau, HMGB1 contribue à la stabilité du génome en participant aux réponses aux dommages de l’ADN et influence des programmes d’expression génique liés aux décisions de destinée cellulaire. Lorsqu’elle est libérée dans le milieu extracellulaire, HMGB1 agit comme un motif moléculaire associé aux dommages (DAMP) qui module la signalisation de l’immunité innée et les voies inflammatoires, notamment des réponses médiées par des récepteurs impliquant les TLR et RAGE. Une activité dérégulée de HMGB1 est largement étudiée dans des contextes tels que l’inflammation stérile, l’auto-immunité, la neuroinflammation, des modèles biologiques de sepsis et l’inflammation associée aux tumeurs dans des systèmes murins.

HMG-1/HMGB1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hmgb1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HMG-1/HMGB1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hmgb1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hmgb1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HMG-1/HMGB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hmgb1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HMG-1/HMGB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HMG-1/HMGB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Hmgb1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.