Plasmide CRISPR d'Activation (h) HLX1: sc-403700-ACT

HLX humain (HLX, aussi appelé HLX1) code un facteur de transcription à homéoboîte qui régule les décisions de destin cellulaire au cours du développement embryonnaire et la spécification des lignages hématopoïétiques. HLX1 module des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, la différenciation et l’organisation des tissus, avec des effets en aval sur les réseaux de signalisation du développement et la maturation des cellules immunitaires. Une expression dérégulée de HLX a été rapportée dans des contextes de tumeurs hématologiques et solides, où une altération du contrôle transcriptionnel peut influencer la signalisation oncogénique, l’état de différenciation et l’invasivité cellulaire. Ces propriétés font de HLX1 un nœud utile pour disséquer les circuits transcriptionnels reliant le développement, la biologie immunitaire et les programmes d’expression génique associés aux maladies.

HLX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HLX sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HLX1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HLX dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HLX, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HLX1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HLX natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HLX1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HLX1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HLX silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.