HLA-DRβ5 Double Nickase Plasmid (h): sc-402985-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HLA-DRβ5 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HLA-DRβ5 Double-Nickase-Plasmid (h) und HLA-DRβ5 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HLA-DRB5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HLA-DRβ5: sc-53889
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HLA-DRβ5 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402985-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HLA-DRβ5 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402985-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HLA-DRB5 kodiert die HLA-DR-β5-Kette, eine polymorphe Komponente von MHC‑Klasse‑II‑Heterodimeren, die aus dem extrazellulären Raum stammende Peptide CD4+‑T‑Zellen präsentieren. Durch die Assemblierung mit HLA-DRA in antigenpräsentierenden Zellen trägt HLA‑DRβ5 zur endosomalen Peptidbeladung, zur Bildung der immunologischen Synapse und zu nachgeschalteten T‑Zell‑Aktivierungsprogrammen bei, die adaptive Immunantworten prägen. Variation in den Peptidbindungsrinnen von MHC‑Klasse II beeinflusst das Antigenrepertoire und die Immuntoleranz und verknüpft HLA‑DR‑Loci mit Anfälligkeit und Stratifizierung in zahlreichen immunvermittelten und entzündlichen Krankheitskontexten. HLA‑DRB5 wird daher breit in der Antigenpräsentationsbiologie, beim HLA‑Haplotyp‑Mapping und in der Erforschung von Mechanismen untersucht, die die Kommunikation zwischen APC und T‑Zellen regulieren.
HLA-DRβ5 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HLA-DRB5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HLA-DRB5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HLA-DRB5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HLA-DRB5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.