Plasmide CRISPR d'Activation (h) HLA-DRβ5: sc-402985-ACT

HLA-DRB5 code la chaîne HLA-DRβ5, qui s’associe à HLA-DRA pour former des hétérodimères HLA-DR du CMH de classe II présentant aux lymphocytes T CD4+ des peptides dérivés de l’espace extracellulaire. Ce programme de présentation antigénique est au cœur de l’activation de l’immunité adaptative, de la sélection thymique et de la tolérance immunitaire périphérique, et il est régulé par le transactivateur de classe II (CIITA) ainsi que par des réseaux transcriptionnels sensibles à l’interféron-γ. L’expression de HLA-DRB5 est surtout marquée dans les cellules présentatrices d’antigènes professionnelles et peut être induite dans d’autres types cellulaires lors d’une inflammation, influençant l’amorçage des lymphocytes T et les issues de la signalisation des cytokines. Les variations des haplotypes HLA de classe II et une expression dérégulée du CMH II sont largement étudiées dans le cadre de l’auto-immunité, de l’immunobiologie de la transplantation et des microenvironnements immunitaires tumoraux.

HLA-DRβ5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HLA-DRB5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HLA-DRβ5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HLA-DRB5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HLA-DRB5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HLA-DRβ5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HLA-DRB5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HLA-DRβ5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HLA-DRβ5 dans les cellules tumorales présentant une expression de HLA-DRB5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.