HLA-DQB1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420756

Panoramica

H2-Ab1 codifica la catena beta dell’MHC di classe II murino, funzionalmente analoga all’HLA-DQB1 umano, e forma un eterodimero che presenta antigeni peptidici extracellulari alle cellule T CD4+. Questo asse di presentazione dell’antigene supporta la selezione timica, l’attivazione delle cellule T periferiche e il mantenimento della tolleranza immunitaria attraverso un traffico regolato e il caricamento dei peptidi nella via endosomiale. La segnalazione dipendente da H2-Ab1 influenza i programmi citochinici e le risposte immunitarie adattative a valle, collegandosi così a meccanismi che modellano infiammazione e autoimmunità. Un’espressione o una presentazione peptidica dell’MHC di classe II deregolate sono state ampiamente associate a una suscettibilità alterata a patologie immunomediate e a una variabilità nelle risposte immunitarie antigene-specifiche nei modelli murini di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HLA-DQB1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene H2-Ab1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del H2-Ab1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto H2-Ab1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HLA-DQB1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di H2-Ab1 per lo studio della segnalazione di HLA-DQB1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni H2-Ab1 critici per la funzione di HLA-DQB1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di H2-Ab1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HLA-DQB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal HLA-DQB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus H2-Ab1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HLA-DQB1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR HLA-DQB1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia H2-Ab1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio H2-Ab1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.