Plasmide CRISPR d'Activation (h) HLA-DQB1: sc-403051-ACT

HLA-DQB1 code la chaîne β du complexe majeur d’histocompatibilité (CMH) de classe II HLA-DQ, qui s’associe à HLA-DQA pour présenter aux lymphocytes T CD4+ des peptides d’origine extracellulaire. Cet axe de présentation antigénique est central dans l’activation de l’immunité adaptative, la sélection thymique et la tolérance périphérique, en modulant l’aide apportée par les lymphocytes T et les réponses des lymphocytes B en aval. Les variations de HLA-DQB1 influencent la spécificité de liaison aux peptides et sont fortement associées à une prédisposition aux maladies auto-immunes et à l’inflammation à médiation immunitaire, notamment le diabète de type 1 et la maladie cœliaque. Une expression dérégulée de HLA-DQ et une présentation antigénique altérée peuvent également affecter la surveillance immunitaire des tumeurs et les réponses aux signaux inflammatoires.

HLA-DQB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HLA-DQB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HLA-DQB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HLA-DQB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HLA-DQB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HLA-DQB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HLA-DQB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HLA-DQB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HLA-DQB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HLA-DQB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.