Plasmide CRISPR d'Activation (h) HLA-DQA1: sc-403480-ACT

HLA-DQA1 code la chaîne alpha de l’hétérodimère HLA-DQ, une molécule du complexe majeur d’histocompatibilité (CMH) de classe II exprimée principalement par les cellules présentatrices d’antigènes. Dans la voie endosomale de traitement et de présentation des antigènes, HLA-DQ se lie à des peptides antigéniques et les présente à la surface cellulaire aux lymphocytes T CD4+, orientant l’activation de l’immunité adaptative, la tolérance et la polarisation immunitaire induite par les cytokines. Les variations de HLA-DQA1 influencent la spécificité de liaison aux peptides et ont été associées à une reconnaissance immunitaire modifiée dans des contextes auto-immuns et inflammatoires, notamment la maladie cœliaque et le diabète de type 1. En tant que locus situé dans la région HLA, ce gène est largement étudié pour ses effets sur le répertoire immunitaire, les réponses des lymphocytes T spécifiques d’antigènes et l’architecture des risques immunogénétiques.

HLA-DQA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HLA-DQA1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HLA-DQA1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HLA-DQA1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HLA-DQA1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HLA-DQA1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HLA-DQA1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HLA-DQA1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HLA-DQA1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HLA-DQA1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.