Plasmide CRISPR d'Activation (h) HIP-55: sc-404008-ACT

Le gène humain **DBNL** code **HIP-55** (de type drebrin), une protéine adaptatrice se liant à l’actine qui relie la signalisation proximale des récepteurs au remodelage dynamique du cytosquelette. HIP-55 participe à l’endocytose et au trafic vésiculaire, et s’interface avec des voies en aval des récepteurs immunitaires et de la signalisation des facteurs de croissance, en coordonnant la déformation membranaire dépendante de l’actine et l’assemblage de complexes protéiques. Par ces fonctions, DBNL influence la motilité cellulaire, l’adhésion et la propagation des signaux, des processus fréquemment perturbés dans les affections inflammatoires et les phénotypes associés au cancer. Une expression ou une localisation dérégulée de HIP-55 a été associée, dans des modèles pertinents pour la maladie, à une invasion cellulaire modifiée et à une altération de l’activation des cellules immunitaires.

HIP-55 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DBNL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HIP-55 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DBNL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DBNL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HIP-55. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DBNL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HIP-55 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HIP-55 dans les cellules tumorales présentant une expression de DBNL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.