Particules Lentivirales d'Activation (h) HIF1a: sc-400036-LAC

HIF1A code le facteur induit par l’hypoxie 1 alpha (HIF1a), un facteur de transcription central sensible à l’oxygène qui intègre les réponses cellulaires à une faible tension en oxygène. En conditions d’hypoxie, HIF1a stabilisé dimérise avec ARNT et se lie aux éléments de réponse à l’hypoxie afin de réguler des gènes contrôlant l’angiogenèse, la glycolyse, l’érythropoïèse, l’homéostasie du pH et la survie cellulaire, en s’articulant avec les voies PI3K–AKT–mTOR, MAPK et les mécanismes de protéostasie médiés par VHL. L’activité de HIF1a façonne la reprogrammation métabolique, la fonction mitochondriale et la gestion des espèces réactives de l’oxygène, influençant les décisions de destinée cellulaire dans des microenvironnements de stress. Une signalisation HIF1A dérégulée est largement associée à la biologie pathologique de l’hypoxie, notamment l’adaptation tumorale, le remodelage inflammatoire, le stress cellulaire lié à l’ischémie, ainsi que des réponses vasculaires et fibrosantes aberrantes.

Les particules d'activation lentivirales HIF1a (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de HIF1A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HIF1a (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription HIF1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HIF1a. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif HIF1A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.