Plasmide CRISPR d'Activation (m) HIF1a: sc-420856-ACT

Le gène murin Hif1a code le facteur induit par l’hypoxie 1 alpha (HIF1a), un facteur de transcription sensible à l’oxygène qui intègre les réponses cellulaires à une diminution de la tension en oxygène. Une fois stabilisé, HIF1a s’hétérodimérise avec ARNT afin d’activer des gènes contenant des éléments de réponse à l’hypoxie, qui régulent le métabolisme glycolytique, la signalisation angiogénique, l’érythropoïèse, la fonction mitochondriale et la survie cellulaire, en interaction avec les apports des voies PI3K–AKT–mTOR et MAPK. HIF1a coordonne également des programmes inflammatoires et immunitaires via des interactions avec NF-κB et les voies redox, modulant la polarisation myéloïde et l’adaptation des barrières. Une signalisation HIF1a dérégulée est largement utilisée comme nœud mécanistique dans des études portant sur l’ischémie, l’inflammation chronique, la fibrose, les maladies métaboliques et la biologie de l’hypoxie tumorale dans des systèmes de modèles murins.

HIF1a Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hif1a sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HIF1a Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hif1a dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hif1a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HIF1a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hif1a natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HIF1a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HIF1a dans les cellules tumorales présentant une expression de Hif1a silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.