Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
HERG Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401143
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HERG O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico HERG, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HERG Anticorpo (F-12): sc-377388
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HERG Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401143 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
KCNH2 codifica o canal humano de potássio dependente de voltagem HERG (Kv11.1), um mediador-chave da corrente retificadora tardia rápida (IKr) que molda a repolarização da fase 3 do potencial de ação cardíaco. A atividade do HERG integra-se a redes mais amplas de canais iônicos e a programas de excitabilidade de membrana para controlar a duração do potencial de ação, a refratariedade e o ritmo. A disfunção de KCNH2 está fortemente associada a fenótipos de arritmia herdados e adquiridos, incluindo a síndrome do QT longo, e é um nó central em pesquisas de eletrofisiologia e farmacologia de segurança. Além de cardiomiócitos, a expressão de KCNH2 tem sido investigada em contextos excitáveis e não excitáveis, nos quais a condutância de potássio influencia a proliferação e estados de sinalização celular.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HERG (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene KCNH2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do KCNH2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do KCNH2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HERG.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de KCNH2 para a investigação da sinalização de HERG, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) KCNH2 críticos para a função HERG
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos KCNH2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo HERG Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HERG Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus KCNH2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo HERG Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HERG (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia KCNH2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo KCNH2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.