hDcp2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418511-ACT

O DCP2 humano codifica a hDcp2, uma enzima de “decapping” de mRNA que remove a tampa 5′ para iniciar a degradação de mRNA no sentido 5′→3′, moldando a renovação de transcritos e a dinâmica do proteoma. A hDcp2 atua em corpos citoplasmáticos de processamento de mRNA e interage com cofatores de decapping e exonucleases para regular a vigilância de RNA, a expressão gênica responsiva ao estresse e vias de controle de qualidade, como a degradação mediada por códon de parada prematuro (nonsense-mediated decay). Ao modular a estabilidade de subconjuntos específicos de mRNAs, o DCP2 influencia o controle do ciclo celular, programas de diferenciação e saídas de sinalização inflamatória. A desregulação da degradação de mRNA e da dinâmica dos corpos de processamento, associada a atividade de decapping alterada, é relevante para mecanismos estudados em biologia do câncer, neurobiologia e interações vírus–hospedeiro envolvendo RNA.

hDcp2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DCP2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

hDcp2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DCP2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DCP2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de hDcp2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DCP2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de hDcp2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via hDcp2 em células tumorais com expressão de DCP2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.