HCF1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403097-ACT

HCFC1 codifica il fattore della cellula ospite 1 (HCF1), un co-regolatore trascrizionale associato alla cromatina che coordina la progressione del ciclo cellulare e l’espressione genica specifica di linea cellulare. HCF1 collega fattori di trascrizione sequenza-specifici ai macchinari epigenetici e trascrizionali, inclusi complessi che modificano gli istoni, per modulare l’attività dei promotori e lo stato della cromatina. Attraverso queste interazioni, HCF1 influenza processi quali la transizione G1/S, i programmi trascrizionali associati alla replicazione e la regolazione dei geni metabolici. La disregolazione o varianti patogene in HCFC1 sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e a un controllo trascrizionale alterato, a supporto della sua rilevanza nello studio dei meccanismi di regolazione genica in modelli di malattia umana.

HCF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HCFC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HCF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HCFC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HCFC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HCF1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HCFC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HCF1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HCF1 nelle cellule tumorali con espressione di HCFC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.