Particules Lentivirales d'Activation (h) HB9: sc-402097-LAC

MNX1 code le facteur de transcription à homéoboîte HB9, un régulateur de la liaison à l’ADN dépendante de la séquence qui contrôle des programmes d’expression génique du développement dans la moelle épinière ventrale et la spécification des motoneurones, ainsi que la différenciation des lignages pancréatiques. HB9 s’intègre à des réseaux plus larges d’homéoboîtes et de différenciation neuronale pour coordonner les décisions de destin cellulaire, les programmes de guidage axonal et des cascades transcriptionnelles associées à la maturation. Une expression dérégulée de MNX1 ou une activité modifiée de HB9 a été associée à des défauts du neurodéveloppement et à une reprogrammation transcriptionnelle oncogénique dans certaines tumeurs, où elle peut influencer la prolifération et l’identité de lignée. Ces liens biologiques font de MNX1/HB9 un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel de la différenciation, le développement des circuits neuronaux et la régulation génique dépendante du contexte.

Les particules d'activation lentivirales HB9 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MNX1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HB9 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MNX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HB9. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MNX1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.