Plasmide Double Nickase (h) HAUSP: sc-402013-NIC

USP7 code l’enzyme déubiquitinante HAUSP, une protéase spécifique de l’ubiquitine qui enlève l’ubiquitine de protéines régulatrices clés afin d’en contrôler la stabilité, la localisation et l’activité. HAUSP est au cœur de la protéostasie dépendante de l’ubiquitine et participe à la réponse aux dommages de l’ADN, à la régulation du cycle cellulaire et à des processus associés à la chromatine, en modulant des facteurs tels que p53 et MDM2. Par ces interactions, USP7 influence la signalisation des points de contrôle, la gestion du stress de réplication et des programmes transcriptionnels qui maintiennent l’intégrité du génome. Une activité d’USP7 dérégulée a été associée à une signalisation de l’ubiquitine aberrante observée dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, notamment des voies oncogènes et des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible fréquente d’études mécanistiques.

HAUSP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus USP7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de USP7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de USP7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de USP7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.