Haptoglobin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401468-ACT

HPはハプトグロビンをコードしており、ハプトグロビンは分泌性の急性期糖タンパク質として、遊離ヘモグロビンに高親和性で結合することで、ヘムに起因する酸化的損傷を防ぎ、血管内溶血後の鉄を保持します。ハプトグロビン–ヘモグロビン複合体は主としてCD163陽性マクロファージによって除去されるため、HPは自然免疫の制御、炎症シグナル伝達、そしてレドックス恒常性と結び付いています。急性期反応の一環として、HPの発現はIL-6/STAT3を含むサイトカイン媒介性経路や、それに関連する転写プログラムによって調節され、全身性炎症を協調的に制御します。HPの量的変化や糖鎖（グリコフォーム）パターンの変化は、溶血状態、炎症性疾患、ならびに心代謝疾患の表現型と関連づけられており、免疫代謝や酸化ストレスの機序研究における重要性を示しています。

Haptoglobin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Haptoglobin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Haptoglobinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHaptoglobin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHaptoglobin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。