Plasmide CRISPR/Cas9 KO HAPLN1 (m): sc-419816

Présentation

Hapln1 code la protéine de liaison à l’hyaluronane et aux protéoglycanes 1 (HAPLN1), un composant de la matrice extracellulaire (MEC) qui stabilise les agrégats hyaluronane–protéoglycane et soutient l’organisation structurale des matrices péricellulaires. En renforçant les interactions entre l’hyaluronane et les protéoglycanes à sulfate de chondroïtine, HAPLN1 contribue à l’intégrité du cartilage et des tissus conjonctifs et influence l’adhésion cellulaire, la mécanotransduction et la signalisation dépendante de la matrice. Son activité est étroitement liée aux processus d’assemblage et de remodelage de la MEC, qui recoupent des voies impliquées dans le développement tissulaire, l’inflammation et la fibrose. Une architecture matricielle associée à HAPLN1 dérégulée a été impliquée dans des phénotypes articulaires dégénératifs ainsi que dans des altérations stromales plus larges pouvant moduler la migration cellulaire et l’homéostasie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HAPLN1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hapln1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hapln1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hapln1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HAPLN1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hapln1 pour l'étude de la signalisation de HAPLN1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hapln1 essentiels à la fonction de HAPLN1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hapln1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HAPLN1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HAPLN1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hapln1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HAPLN1 plasmide HDR (m) et le HAPLN1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hapln1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hapln1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.