HAPLN1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403874-ACT

HAPLN1 (proteina di collegamento 1 dell’ialuronano e dei proteoglicani) è una glicoproteina della matrice extracellulare che stabilizza gli aggregati di ialuronano con proteoglicani a solfato di condroitina, sostenendo l’organizzazione della matrice e la biomeccanica dei tessuti. È nota soprattutto per i suoi ruoli nella cartilagine e nei tessuti connettivi, dove contribuisce a mantenere l’integrità della matrice pericellulare e influenza l’adesione cellulare, la migrazione e la meccanotrasduzione. La funzione di HAPLN1 si intreccia con programmi di rimodellamento della MEC e con vie di segnalazione che rispondono alla composizione della matrice, incluse cascate dipendenti da integrine e fattori di crescita. Un’espressione deregolata di HAPLN1 e un’alterata assemblazione della matrice sono state associate a processi degenerativi e fibrotici e vengono spesso valutate in studi sulle interazioni tumore–stroma e sul rimodellamento della nicchia metastatica.

HAPLN1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di HAPLN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HAPLN1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus HAPLN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione HAPLN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HAPLN1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus HAPLN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HAPLN1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HAPLN1 nelle cellule tumorali con espressione di HAPLN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.