Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) hamartin: sc-402444-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) hamartin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide hamartin Double Nickase (h) et le plasmide hamartin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant TSC1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: hamartin Antibody (C-8): sc-377386
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) hamartin | sc-402444-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) hamartin | sc-402444-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TSC1 code l’hamartine, un composant central du complexe TSC1–TSC2 qui intègre les signaux liés aux nutriments et aux facteurs de croissance afin de freiner la signalisation de mTORC1 via la régulation de la petite GTPase Rheb. En modulant la synthèse protéique dépendante de mTORC1, l’autophagie et le métabolisme cellulaire, l’hamartine contribue au contrôle de la croissance cellulaire, de la prolifération et des réponses au stress. La perturbation de TSC1 déséquilibre l’homéostasie de la voie PI3K–AKT–mTOR et modifie les programmes traductionnels et lysosomaux en aval. Les variations génétiques ou la perte de fonction de TSC1 sont fortement associées à la biologie de la sclérose tubéreuse de Bourneville et à des phénotypes cellulaires apparentés, pilotés par mTOR, ce qui en fait une cible couramment utilisée pour l’étude des voies de signalisation et des mécanismes de la maladie.
hamartin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TSC1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TSC1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TSC1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TSC1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.