Plasmide CRISPR/Cas9 KO HAI-2 (m): sc-423129

Présentation

Spint2 code l’inhibiteur de protéases à sérine HAI‑2, un régulateur de type Kunitz associé à la membrane qui limite la protéolyse péricellulaire en inhibant des protéases à sérine transmembranaires de type II telles que la matriptase et l’hepsine. En restreignant l’activation, induite par les protéases, des facteurs de croissance et en modulant le renouvellement de la matrice extracellulaire, HAI‑2 influence l’intégrité de la barrière épithéliale, le remodelage tissulaire et les programmes de polarité cellulaire. Dans les systèmes murins, l’altération de l’activité SPINT2/HAI‑2 est utilisée pour étudier un déséquilibre protéase–inhibiteur associé à une dysfonction épithéliale et à une signalisation stroma–épithélium aberrante. Ces processus recoupent des voies qui régissent l’adhésion, la migration et des cascades de signalisation dépendantes des protéases, pertinentes pour la modélisation de l’inflammation et de la biologie tumorale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HAI-2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Spint2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Spint2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Spint2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HAI-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Spint2 pour l'étude de la signalisation de HAI-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Spint2 essentiels à la fonction de HAI-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Spint2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HAI-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HAI-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Spint2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HAI-2 plasmide HDR (m) et le HAI-2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Spint2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Spint2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.