Plasmide Double Nickase (h) HADHB: sc-403234-NIC

HADHB code la sous-unité bêta de la protéine trifonctionnelle mitochondriale, un complexe enzymatique clé qui catalyse des étapes essentielles de la β‑oxydation des acides gras à longue chaîne, notamment l’activité thiolase 3‑ketoacyl‑CoA à longue chaîne. Par son rôle dans le métabolisme énergétique mitochondrial, HADHB contribue au maintien de la production d’ATP cellulaire et de l’homéostasie lipidique, en particulier lorsque le flux d’acides gras est élevé. Une altération de la fonction de HADHB est associée à des troubles héréditaires de l’oxydation mitochondriale des acides gras, tels que le déficit en protéine trifonctionnelle mitochondriale et le déficit en déshydrogénase des 3‑hydroxyacyl‑CoA à longue chaîne, pouvant se manifester par une décompensation métabolique et une cardiomyopathie. HADHB est donc largement étudié dans les voies reliant la dysfonction mitochondriale, le stress oxydant et les lésions cellulaires induites par les lipides.

HADHB Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HADHB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HADHB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HADHB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HADHB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.