Particules Lentivirales d'Activation (h) GULP: sc-406041-LAC

GULP1 code pour la protéine adaptatrice GULP, un facteur contenant un domaine de liaison aux phosphotyrosines qui relie les récepteurs d’engloutissement de surface cellulaire à la signalisation intracellulaire lors de l’efférocytose et de la phagocytose. GULP agit en aval de récepteurs tels que LRP1/MEGF10 et s’intègre aux programmes de remodelage du cytosquelette et de trafic membranaire afin de favoriser l’élimination des cellules apoptotiques et des débris cellulaires. Par ces processus, GULP influence le niveau d’inflammation et l’homéostasie tissulaire en modulant la façon dont les cellules myéloïdes et les phagocytes non professionnels résolvent la mort cellulaire. La dérégulation des voies d’engloutissement et de clairance impliquant GULP1 a été étudiée dans des contextes incluant la neuroinflammation, les maladies neurodégénératives et la biologie du cancer, où une clairance altérée des débris peut affecter la signalisation du microenvironnement.

Les particules d'activation lentivirales GULP (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de GULP1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GULP (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription GULP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GULP. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif GULP1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.