Plasmide CRISPR d'Activation (h) GTSF1L: sc-410333-ACT

GTSF1L (gametocyte-specific factor 1-like) code une petite protéine de liaison à l’ARN, enrichie dans la lignée germinale, et supposée participer à la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique. D’après son homologie avec les protéines de la famille GTSF, GTSF1L est associée aux voies dépendantes des piARN, qui contribuent à réguler les éléments transposables et à préserver l’intégrité du génome au cours du développement des cellules germinales. Ces processus recoupent l’extinction génique médiée par l’ARN, la régulation de la chromatine et le maintien de la stabilité épigénétique dans les tissus reproducteurs. La dérégulation des programmes de défense du génome propres à la lignée germinale, ainsi que l’expression aberrante de facteurs germinaux dans des contextes somatiques, sont fréquemment étudiées comme des facteurs contribuant à l’instabilité génomique et à des profils d’expression de type antigènes cancer/testis.

GTSF1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GTSF1L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GTSF1L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GTSF1L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GTSF1L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GTSF1L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GTSF1L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GTSF1L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GTSF1L dans les cellules tumorales présentant une expression de GTSF1L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.