Plasmide CRISPR d'Activation (m) GTSF1: sc-428766-ACT

Le gène murin **Gtsf1** code **GTSF1**, une protéine à doigts de zinc enrichie dans la lignée germinale, impliquée dans le fonctionnement de la voie **PIWI–piRNA** et dans le silençage des transposons au cours de la spermatogenèse. GTSF1 contribue au maintien de l’intégrité du génome en favorisant la répression des rétrotransposons et en coordonnant une régulation épigénétique guidée par les petits ARN dans les cellules germinales en développement. La perturbation des processus associés à **Gtsf1** est liée à des défauts de fertilité mâle et à un développement anormal des cellules germinales, ce qui en fait une cible pertinente pour les études de la méiose, de la gamétogenèse et de la défense du génome. En tant que nœud au sein des réseaux de régulation des petits ARN et de la chromatine, GTSF1 est couramment étudiée pour ses rôles dans le contrôle transcriptionnel et l’homéostasie de la lignée germinale.

GTSF1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gtsf1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GTSF1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gtsf1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gtsf1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GTSF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gtsf1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GTSF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GTSF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gtsf1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.