Plasmide Double Nickase (h) GSTA1: sc-403681-NIC

La glutathion S-transférase alpha 1 (GSTA1) est une enzyme cytosolique de détoxification de phase II qui catalyse la conjugaison du glutathion à des xénobiotiques électrophiles ainsi qu’à des produits endogènes de la peroxydation lipidique, facilitant leur inactivation et leur élimination. Elle contribue à l’homéostasie rédox et à la protection contre le stress oxydant en limitant l’accumulation d’aldéhydes réactifs et en modulant les réponses cellulaires aux dommages induits par les électrophiles. L’activité de GSTA1 s’inscrit à l’interface du métabolisme du glutathion et de programmes antioxydants plus larges, notamment des voies coordonnées par la signalisation NRF2/KEAP1. Des altérations de l’expression ou de la fonction de GSTA1 ont été associées à une variabilité interindividuelle du métabolisme des médicaments et à la susceptibilité aux lésions hépatiques induites par des toxiques, ce qui étaye sa pertinence en pharmacogénomique et dans les modèles de stress hépatocellulaire.

GSTA1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GSTA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GSTA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GSTA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GSTA1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.