Plasmide CRISPR d'Activation (h) GSDMDC1: sc-406596-ACT

GSDMD (gasdermine D ; également référencée comme GSDMDC1) code un effecteur formateur de pores de la mort cellulaire inflammatoire, activé par un clivage protéolytique en aval de la signalisation des inflammasomes. Après clivage par la caspase-1 ou par les voies des caspases-4/5/11, le fragment N-terminal s’oligomérise dans les membranes pour déclencher la pyroptose et favoriser la libération de cytokines de la famille de l’IL‑1, reliant la détection immunitaire innée à une mort cellulaire lytique. Cet axe s’intègre aux voies de l’inflammasome NLRP3 et à d’autres voies apparentées, modulant la défense antimicrobienne et l’inflammation stérile. Une activité dérégulée de GSDMD a été impliquée dans des états inflammatoires chroniques, des modèles d’inflammation associée au sepsis et des interactions tumeur–système immunitaire, ce qui motive des études mécanistiques de la mort cellulaire et de la biologie des cytokines dans des systèmes humains.

GSDMDC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GSDMD sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GSDMDC1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GSDMD dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GSDMD, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GSDMDC1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GSDMD natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GSDMDC1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GSDMDC1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GSDMD silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.