Plasmide Double Nickase (h) group VI iPLA₂: sc-402107-NIC

PLA2G6 code la iPLA2 du groupe VI, une phospholipase A2 indépendante du calcium qui hydrolyse les phospholipides membranaires afin de produire des acides gras libres et des lysophospholipides, modulant ainsi la signalisation lipidique et le remodelage des membranes. Cette enzyme contribue à l’homéostasie des phospholipides, à l’intégrité mitochondriale, au trafic vésiculaire et à la biologie des médiateurs inflammatoires via des voies liées à l’acide arachidonique. L’activité de PLA2G6 interagit avec les réponses au stress oxydant et la mort cellulaire programmée, influençant la sensibilité cellulaire à la peroxydation lipidique et au dysfonctionnement des organites. Des altérations génétiques de PLA2G6 sont associées à des neurodégénérescences avec accumulation de fer cérébral et à des phénotypes parkinsoniens apparentés à début précoce, ce qui souligne sa pertinence pour la recherche sur le maintien neuronal et le métabolisme lipidique.

group VI iPLA2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PLA2G6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PLA2G6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PLA2G6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PLA2G6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.