Plasmide CRISPR/Cas9 KO Grim19 (h): sc-403264

Présentation

NDUFA13 (GRIM19) code une sous-unité accessoire conservée du complexe I mitochondrial, qui soutient la phosphorylation oxydative et le transfert correct des électrons au sein de la chaîne respiratoire. Grim19 contribue au maintien du potentiel de membrane mitochondrial et à la bioénergétique cellulaire, reliant le métabolisme mitochondrial à l’homéostasie redox et à la susceptibilité à l’apoptose. Au-delà de son rôle dans l’assemblage et la fonction du complexe I, GRIM19 a été décrit comme interagissant avec des programmes de transduction du signal tels que la transcription dépendante de STAT3, établissant un lien entre l’état mitochondrial et la régulation des gènes nucléaires. La dérégulation de NDUFA13/Grim19 est associée à des phénotypes de dysfonctionnement mitochondrial et a été étudiée dans des contextes où une respiration altérée et une signalisation de stress contribuent à des états cellulaires pertinents pour la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Grim19 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NDUFA13 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NDUFA13, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NDUFA13 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Grim19.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NDUFA13 pour l'étude de la signalisation de Grim19, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NDUFA13 essentiels à la fonction de Grim19
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NDUFA13 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Grim19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Grim19 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NDUFA13. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Grim19 plasmide HDR (h) et le Grim19 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NDUFA13 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NDUFA13 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.