Plasmide CRISPR d'Activation (h) Grim19: sc-403264-ACT

Le gène humain NDUFA13 code Grim19, une sous-unité accessoire du complexe I de la chaîne respiratoire mitochondriale, qui soutient le transfert d’électrons et la phosphorylation oxydative, contribuant au maintien du potentiel de membrane mitochondrial et à la production d’ATP cellulaire. Au-delà de la bioénergétique, Grim19 a été associé à l’homéostasie redox et à la signalisation du stress mitochondrial, reliant la fonction mitochondriale à une régulation plus large de l’apoptose et des réseaux de signalisation inflammatoire. Une expression altérée de NDUFA13 ou un dysfonctionnement du complexe I est associé à des mécanismes de maladies mitochondriales et a été étudié dans des contextes de dérégulation métabolique, de neurodégénérescence et de biologie tumorale, où la respiration, les ROS et les voies de survie cellulaire se croisent.

Grim19 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NDUFA13 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Grim19 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NDUFA13 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NDUFA13, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Grim19. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NDUFA13 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Grim19 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Grim19 dans les cellules tumorales présentant une expression de NDUFA13 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.