gremlin-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423886-ACT

O gene Grem2 de camundongo codifica a gremlin-2, uma proteína secretada do tipo “cystine-knot” que atua como antagonista extracelular de ligantes BMP, moldando gradientes de sinalização da superfamília BMP/TGF-β e programas transcricionais downstream dependentes de SMAD. Ao modular sinais de diferenciação mediados por BMP, a gremlin-2 contribui para a regulação do padrão tecidual, da organogênese e do crosstalk estroma–epitélio, com efeitos a jusante na remodelação da matriz extracelular e em decisões de destino celular. A expressão desregulada de Grem2 ou o antagonismo de BMP tem sido associada na literatura a processos de desenvolvimento aberrantes e a alterações na sinalização homeostática em contextos como fenótipos musculoesqueléticos, reprodutivos e semelhantes aos fibróticos. Essas propriedades tornam o Grem2 um alvo útil para dissecar feedbacks da via BMP, especificação de linhagens e compensação em redes de sinalização em modelos de células e organoides de camundongo.

gremlin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Grem2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

gremlin-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Grem2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Grem2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de gremlin-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Grem2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de gremlin-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via gremlin-2 em células tumorais com expressão de Grem2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.