Plasmide CRISPR d'Activation (h) granzyme B: sc-401469-ACT

Le gène humain **GZMB** code la **granzyme B**, une sérine protéase de type trypsine stockée dans les granules cytotoxiques des lymphocytes T CD8+ et des cellules NK, qui assure la mise à mort des cellules cibles après une délivrance dépendante de la perforine. La granzyme B clive des substrats clés pour activer une apoptose dépendante des caspases et peut également engager des voies de mort indépendantes des caspases via une perturbation mitochondriale, ce qui la relie aux programmes effecteurs immunitaires en aval de la reconnaissance antigénique et des signaux inflammatoires. Une expression et une activité dérégulées de **GZMB** ont été associées à des lésions tissulaires et à un remodelage d’origine immunitaire dans l’inflammation chronique et l’auto-immunité, ainsi qu’à une surveillance cytotoxique altérée dans des contextes de cancer et d’infection virale. En conséquence, **GZMB** est largement utilisé comme marqueur fonctionnel de l’activation des lymphocytes cytotoxiques et comme nœud mécanistique pour étudier l’apoptose, la biologie de la synapse immunologique et l’immunopathologie.

granzyme B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GZMB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

granzyme B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GZMB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GZMB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de granzyme B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GZMB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de granzyme B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie granzyme B dans les cellules tumorales présentant une expression de GZMB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.