GPR84 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401953-ACT

O GPR84 humano codifica um recetor acoplado à proteína G que é enriquecido em linhagens mieloides e atua como sensor de ácidos gordos de cadeia média, ligando metabolitos lipídicos à ativação imunitária inata. Após a ligação do ligando, o GPR84 acopla-se principalmente à sinalização Gi/o para modular os níveis de AMPc e vias a jusante que moldam a quimiotaxia, a produção de citocinas e programas de genes inflamatórios. Está implicado em respostas de macrófagos e micróglia, com relevância reportada para estados inflamatórios crónicos e inflamação metabólica. A sinalização desregulada do GPR84 tem sido associada a patologia mediada pelo sistema imunitário em vários tecidos, apoiando a sua utilização como ferramenta para investigar mecanismos imunometabólicos.

GPR84 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPR84 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR84 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPR84 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPR84, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR84. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPR84 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR84 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR84 em células tumorais com expressão de GPR84 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.