Plasmide Double Nickase (h) GPR43: sc-401858-NIC

Le gène humain **FFAR2** code **GPR43**, un RCPG détecteur des acides gras à chaîne courte, activé par l’acétate et le propionate, et couplé principalement aux voies de signalisation **Gαi/o** et **Gαq**. GPR43 régule l’inhibition de l’AMPc, la mobilisation du calcium dépendante de la PLC, ainsi que des programmes en aval liés à **MAPK** et **NF-κB** qui façonnent la chimiotaxie, la libération de cytokines et les réponses immunitaires associées à la barrière. Son expression dans les lignées myéloïdes et dans des contextes épithéliaux relie **FFAR2** à la détection des métabolites microbiens et au dialogue métabolique–inflammatoire. Une signalisation dysrégulée de GPR43 a été associée à des altérations du recrutement leucocytaire et à des phénotypes inflammatoires pertinents pour l’inflammation gastro-intestinale, l’inflammation des voies aériennes et les dysfonctions métaboliques.

GPR43 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FFAR2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FFAR2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FFAR2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FFAR2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.