GPR35 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-425672-LAC

O gene **Gpr35** de camundongo codifica o **GPR35**, um receptor acoplado à proteína G do tipo rodopsina, implicado na detecção de ligantes de pequenas moléculas e na modulação de respostas de sinalização intracelular que influenciam o fluxo de cálcio, a dinâmica de cAMP e programas transcricionais a jusante. A atividade do GPR35 tem sido associada à regulação da quimiotaxia e ativação de células imunes, às respostas da barreira epitelial e a redes mais amplas de sinalização inflamatória, incluindo vias que interagem com a expressão gênica dependente de MAPK e NF-κB. Expressão e associações genéticas de GPR35 foram relatadas em tecidos relevantes para a imunidade mucosal e a homeostase metabólica, motivando investigações em modelos de inflamação intestinal, sinalização de dor e fenótipos cardiometabólicos. Como um GPCR conservado, com acoplamento dependente do contexto, o GPR35 oferece um ponto de intervenção tratável para dissecar programas de regulação gênica dirigidos por receptores em células primárias e em sistemas murinos relevantes para doenças.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR35 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Gpr35 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais GPR35 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Gpr35, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de GPR35. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Gpr35 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.