Plasmide CRISPR d'Activation (m) GPR35: sc-425672-ACT

Le gène murin **Gpr35** code pour **GPR35**, un récepteur couplé aux protéines G exprimé dans des types cellulaires du système immunitaire et du tractus gastro-intestinal, où il module les réponses chimiotactiques, la signalisation des cytokines et les programmes liés à la barrière épithéliale. L’activité de GPR35 est associée à des voies de seconds messagers médiées par les GPCR, notamment la signalisation dépendante de **Gαi/o**, le recrutement de **β-arrestine**, ainsi que la régulation en aval de **MAPK/ERK** et des réponses transcriptionnelles associées. Dans des modèles expérimentaux, une signalisation altérée de GPR35 a été associée aux circuits inflammatoires intestinaux et, plus largement, à l’homéostasie immunitaire, ce qui étaye sa pertinence pour l’étude de l’inflammation des muqueuses et du remodelage tissulaire d’origine immunitaire. Comme GPR35 répond à des signaux métaboliques et inflammatoires, il est fréquemment étudié dans des contextes reliant les métabolites microbiens, la détection des nutriments et la fonction des leucocytes.

GPR35 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Gpr35 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPR35 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Gpr35 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Gpr35, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPR35. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Gpr35 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPR35 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPR35 dans les cellules tumorales présentant une expression de Gpr35 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.