Plasmide CRISPR d'Activation (h) GPD1: sc-403706-ACT

Le gène humain **GPD1** code la glycéro-3-phosphate déshydrogénase 1 cytosolique, une enzyme dépendante du NADH qui interconvertit le dihydroxyacétone phosphate et le glycérol-3-phosphate afin de coupler le métabolisme des glucides à la biosynthèse des lipides. Cette activité soutient la navette du glycérol-3-phosphate, contribue à l’homéostasie rédox et fournit du glycérol-3-phosphate pour la formation des triglycérides et des phospholipides. Par son rôle à l’interface de la glycolyse, du métabolisme des glycérolipides et de l’équilibre cellulaire NADH/NAD+, **GPD1** contribue à orienter les flux métaboliques en conditions de stress nutritionnel et d’hypoxie. Des voies associées à **GPD1** et dérégulées ont été reliées dans la littérature à des phénotypes métaboliques impliquant la gestion des lipides hépatiques et, plus largement, l’homéostasie énergétique, ce qui en fait un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la régulation métabolique.

GPD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPD1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GPD1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPD1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPD1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GPD1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPD1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GPD1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GPD1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPD1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.