GPAMCRISPR激活质粒(h): sc-403961-ACT

人源 GPAM（甘油-3-磷酸酰基转移酶，线粒体型）通过将甘油-3-磷酸与长链酰基辅酶A转化为溶血磷脂酸，催化从头（de novo）甘油脂合成的起始且限速步骤。该酶活性将线粒体中的脂质处理与磷脂酸生成、三酰甘油装配以及更广泛的磷脂重塑联系起来，从而影响膜生物发生和脂滴形成。GPAM 位于脂肪酸利用与能量稳态的交汇处，并对下游信号脂质及代谢网络平衡产生影响。GPAM 表达或活性发生改变与脂质代谢失调表型有关，这些表型与肝脂肪变性、胰岛素抵抗以及心代谢风险相关通路密切相关，因此 GPAM 是代谢生物学机制研究中的一个有用关键节点。

GPAM CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性GPAM的表达。

GPAM CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的GPAM基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于GPAM转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性GPAM表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的GPAM位点，并能够研究内源性位点上依赖于GPAM的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在GPAM表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟GPAM通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。