Plasmide CRISPR/Cas9 KO GP-39 (h): sc-402147

Présentation

CHI3L1 code pour GP‑39 (YKL‑40), une glycoprotéine sécrétée de la famille des protéines de type chitinase, dépourvue d’activité enzymatique mais qui module l’organisation de la matrice extracellulaire, l’adhésion cellulaire et le remodelage tissulaire. GP‑39 est produite par de nombreux types cellulaires, notamment les macrophages, les neutrophiles et des cellules de type fibroblastique, et elle est associée à la signalisation inflammatoire ainsi qu’aux interactions entre le stroma et le système immunitaire. Elle est impliquée dans la régulation de processus angiogéniques et fibrotiques et fait l’objet d’études fréquentes dans des contextes de inflammation chronique et de renouvellement anormal de la matrice. Une expression dérégulée de CHI3L1 a été associée à divers phénotypes pertinents pour la maladie, notamment le stroma associé au cancer, la neuroinflammation et des états inflammatoires métaboliques et des voies aériennes, ce qui en fait un nœud utile pour les recherches sur les voies biologiques et les mécanismes de biomarqueurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GP-39 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CHI3L1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CHI3L1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CHI3L1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GP-39.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CHI3L1 pour l'étude de la signalisation de GP-39, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CHI3L1 essentiels à la fonction de GP-39
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CHI3L1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GP-39 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GP-39 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CHI3L1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GP-39 plasmide HDR (h) et le GP-39 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CHI3L1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CHI3L1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.