GOLGB1 Double Nickaseプラスミド (m): sc-432441-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GOLGB1 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- GOLGB1ダブルニカースプラスミド（m）およびGOLGB1ダブルニカースプラスミド（m2）は、Golgb1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GOLGB1 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-432441-NIC | 20 µg | $410.00 |
Golgb1 は、ゴルジン（golgin）ファミリーの足場タンパク質である GOLGB1（giantin）をコードする。GOLGB1 はゴルジ・マトリクスを構成する大型のコイルドコイル成分で、ゴルジ・リボンのアーキテクチャの維持や、小胞テザリングの組織化に寄与する。GOLGB1 は、ER からゴルジへの輸送、ゴルジ内でのカーゴの輸送進行、ならびに分泌タンパク質・膜タンパク質の糖鎖依存的な成熟を支えるトラフィッキング経路と相互に関わる。ゴルジ恒常性における役割を通じて、Golgb1 は発生や組織構築の中核となる細胞外マトリクスの沈着、受容体の細胞表面発現、極性分泌といった過程に影響を及ぼす。giantin を含むゴルジ構造タンパク質の攪乱は、繊毛形成や結合組織生物学における異常と関連づけられており、Golgb1 は発生表現型に関わるオルガネラ依存的メカニズムを研究するための有用な標的となる。
GOLGB1 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Golgb1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Golgb1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Golgb1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Golgb1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。