Particules Lentivirales d'Activation (m2) glypican-4: sc-420640-LAC-2

Chez la souris, le gène Gpc4 code la glypican-4, un protéoglycane à héparane sulfate ancré par glycosylphosphatidylinositol, localisé à la surface cellulaire et dans la matrice extracellulaire, où il régule la distribution des morphogènes et des facteurs de croissance. La glypican-4 module des voies de signalisation telles que Wnt/β-caténine, FGF et BMP en façonnant les interactions ligand–récepteur et en établissant des gradients qui influencent la prolifération, la différenciation et la mise en place des patrons tissulaires au cours du développement. Une activité ou une expression altérée de Gpc4 est associée à une dérégulation de la signalisation extracellulaire et a été étudiée dans des contextes tels que l’homéostasie métabolique, la biologie du tissu adipeux et les processus de neurodéveloppement, ce qui en fait un gène pertinent pour l’étude de la génétique des caractères complexes. L’édition génétique de Gpc4 dans des modèles murins permet de disséquer les mécanismes de signalisation dépendants de l’héparane sulfate, la communication cellule–cellule et la régulation de la matrice extracellulaire, au travers de phénotypes liés au développement et aux maladies.

Les particules d'activation lentivirales glypican-4 (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Gpc4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales glypican-4 (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Gpc4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de glypican-4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Gpc4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.