Plasmide CRISPR d'Activation (h) glypican-1: sc-402002-ACT

Le gène humain **GPC1** code la glypican-1, un protéoglycane à héparane sulfate ancré au glycosylphosphatidylinositol (GPI), localisé à la surface cellulaire et capable de se lier à divers facteurs de croissance, morphogènes et composants de la matrice extracellulaire. En modulant la disponibilité des ligands et l’engagement des récepteurs, la glypican-1 influence les sorties de signalisation de voies telles que FGF, VEGF, Wnt, Hedgehog et TGF-β, avec des effets en aval sur la prolifération, l’adhésion, la migration et les programmes angiogéniques. Des altérations de l’expression de **GPC1** et le clivage/relargage de la glypican-1 ont été associés à des changements dans la communication au sein du microenvironnement tumoral, à des phénotypes invasifs et à des études de biomarqueurs dans plusieurs contextes de cancer. Au-delà de l’oncologie, la régulation des interactions de l’héparane sulfate dépendante de la glypican-1 est pertinente pour des processus neurodéveloppementaux ainsi que pour les réponses cellulaires aux lésions et à l’inflammation.

glypican-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPC1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

glypican-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPC1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPC1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de glypican-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPC1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de glypican-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie glypican-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPC1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.