Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glutathione Peroxidase 4/GPX4: sc-401558-ACT

GPX4 (glutathion peroxydase 4) code une phospholipide hydroperoxydase dépendante du sélénium qui réduit les hydroperoxydes lipidiques membranaires en utilisant le glutathion, maintenant l’homéostasie rédox et préservant l’intégrité des membranes. En tant que suppresseur central de la ferroptose, GPX4 s’intègre au métabolisme du glutathion, au contrôle de la peroxydation lipidique et aux voies de défense antioxydante, influençant les réponses au stress oxydant mitochondriales et associées au réticulum endoplasmique. Une activité dérégulée de GPX4 a été associée à une sensibilité modifiée aux lésions oxydatives et à la mort cellulaire ferroptotique dans des contextes incluant la biologie du cancer, la neurodégénérescence et les dommages tissulaires inflammatoires. Son expression et sa capacité enzymatique sont donc largement étudiées dans des modèles d’accumulation de ROS lipidiques, de mort cellulaire dépendante du fer et de signalisation d’adaptation au stress.

Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPX4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glutathione Peroxidase 4/GPX4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPX4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPX4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glutathione Peroxidase 4/GPX4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPX4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glutathione Peroxidase 4/GPX4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glutathione Peroxidase 4/GPX4 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPX4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.