Glutathione Peroxidase 2/GPX2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-406827-ACT

A GPX2 (glutationa peroxidase 2) humana é uma enzima antioxidante dependente de selênio que reduz o peróxido de hidrogênio e os hidroperóxidos lipídicos utilizando glutationa, ajudando a manter a homeostase redox em barreiras epiteliais. Ao limitar o dano oxidativo, a GPX2 influencia a sinalização sensível a ROS, incluindo respostas ao estresse mediadas por NRF2, vias inflamatórias e decisões celulares relacionadas à proliferação e à apoptose. A atividade da GPX2 está intimamente ligada ao metabolismo da glutationa e a processos mais amplos de desintoxicação que moldam a função mitocondrial e a integridade dos lipídios de membrana. A expressão desregulada de GPX2 tem sido associada a fenótipos de estresse oxidativo e a patologias ligadas à inflamação, sendo frequentemente estudada em contextos como biologia gastrointestinal, diferenciação epitelial e adaptação redox associada a tumores.

Glutathione Peroxidase 2/GPX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPX2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Glutathione Peroxidase 2/GPX2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPX2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPX2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Glutathione Peroxidase 2/GPX2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPX2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Glutathione Peroxidase 2/GPX2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Glutathione Peroxidase 2/GPX2 em células tumorais com expressão de GPX2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.