Plasmide CRISPR d'Activation (h) Glutathione Peroxidase 2/GPX2: sc-406827-ACT

La GPX2 (glutathion peroxydase 2) humaine est une enzyme antioxydante dépendante du sélénium qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes lipidiques en utilisant le glutathion, contribuant ainsi au maintien de l’homéostasie rédox au niveau des barrières épithéliales. En limitant les dommages oxydatifs, GPX2 influence des voies de signalisation sensibles aux ROS, notamment les réponses au stress pilotées par NRF2, les voies inflammatoires et les décisions cellulaires concernant la prolifération et l’apoptose. L’activité de GPX2 est étroitement liée au métabolisme du glutathion et à des processus plus larges de détoxification qui façonnent la fonction mitochondriale et l’intégrité des lipides membranaires. Une expression dérégulée de GPX2 a été associée à des phénotypes de stress oxydatif et à des pathologies liées à l’inflammation, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes tels que la biologie gastro-intestinale, la différenciation épithéliale et l’adaptation rédox associée aux tumeurs.

Glutathione Peroxidase 2/GPX2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GPX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Glutathione Peroxidase 2/GPX2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GPX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GPX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Glutathione Peroxidase 2/GPX2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GPX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Glutathione Peroxidase 2/GPX2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Glutathione Peroxidase 2/GPX2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GPX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.