Plasmide Double Nickase (m) GluR-4: sc-420681-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) GluR-4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GluR-4 Double Nickase (m) et le plasmide GluR-4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Gria4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GluR-4 Antibody (F-9): sc-271894
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) GluR-4 | sc-420681-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) GluR-4 | sc-420681-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Gria4 code pour la sous-unité GluR-4 (GluA4) du récepteur au glutamate de type AMPA, un canal cationique activé par un ligand qui assure la neurotransmission excitatrice rapide dans le système nerveux central de la souris. GluR-4 contribue à l’assemblage du récepteur, à son ciblage synaptique et à un trafic dépendant de l’activité qui façonne la force synaptique et le moment des décharges, ce qui l’associe à des processus de plasticité synaptique tels que la LTP/LTD. La signalisation des récepteurs AMPA coordonne des cascades dépendantes de flux de calcium (via des récepteurs perméables au calcium) et de sodium, qui influencent le développement dendritique, l’excitabilité neuronale et la synchronisation des réseaux. La dérégulation de la composition des récepteurs AMPA ou de la signalisation glutamatergique est fréquemment étudiée dans le contexte de phénotypes neurodéveloppementaux et neuropsychiatriques, de réponses au stress excitotoxique et de la susceptibilité aux crises dans des modèles murins.
GluR-4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Gria4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Gria4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Gria4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Gria4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.