GLULD1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-409944-ACT

O gene humano **LGSN** codifica **GLULD1** (também conhecido como **lengsin**), uma proteína enriquecida no cristalino, implicada na manutenção da homeostase das proteínas cristalinas e da arquitetura celular durante a diferenciação das células-fibra do cristalino. Estudos funcionais associam LGSN/GLULD1 à organização do citoesqueleto e a processos de proteostase que sustentam a transparência e a resistência à agregação nos tecidos oculares. A expressão alterada ou a disfunção de fatores de manutenção estrutural do cristalino é relevante para a biologia da catarata e para outros distúrbios caracterizados por mau enovelamento proteico e comprometimento da integridade do cristalino. Essas características tornam o LGSN um alvo útil para investigar programas de diferenciação específicos de tecido e respostas ao estresse que impactam a estabilidade do proteoma.

GLULD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LGSN sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GLULD1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LGSN em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LGSN, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GLULD1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LGSN nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GLULD1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GLULD1 em células tumorais com expressão de LGSN silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.