Plásmido CRISPR de Activación (h) GLUD1: sc-402187-ACT

El gen humano **GLUD1** codifica la glutamato deshidrogenasa mitocondrial 1, una enzima dependiente de **NAD(P)+** que cataliza la desaminación oxidativa reversible del glutamato a **α-cetoglutarato** y amoníaco, conectando el catabolismo de aminoácidos con el ciclo del **TCA**. Al regular el equilibrio entre la utilización de glutamato y el flujo anaplerótico, **GLUD1** influye en la bioenergética celular, la homeostasis redox y el metabolismo del nitrógeno, con efectos posteriores sobre los reservorios de neurotransmisores y el acoplamiento metabólico. La actividad de **GLUD1** se integra con vías que controlan la función mitocondrial y la señalización metabólica, y su regulación alterada se ha asociado con trastornos que implican el manejo de aminoácidos y la desregulación metabólica neuroendocrina. Estas características hacen de **GLUD1** una diana relevante para estudios mecanísticos del metabolismo mitocondrial y de fenotipos celulares dependientes del glutamato.

GLUD1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GLUD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GLUD1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GLUD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GLUD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GLUD1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GLUD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GLUD1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GLUD1 en células tumorales con expresión de GLUD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.