Glucose Transporter Glut2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400347-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Glucose Transporter Glut2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Glucose Transporter Glut2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Glucose Transporter Glut2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SLC2A2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Glucose Transporter Glut2: sc-518022
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Glucose Transporter Glut2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400347-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Glucose Transporter Glut2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400347-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC2A2 kodiert den Glukosetransporter GLUT2, einen erleichterten Hexosetransporter, der in stoffwechselaktiven Geweben einen bidirektionalen Glukosefluss über die Plasmamembran vermittelt und damit die Glukosesensorik sowie die homöostatische Kontrolle des Kohlenhydratstoffwechsels unterstützt. GLUT2 beeinflusst die zelluläre Energiebilanz, indem er die Substratverfügbarkeit für die Glykolyse und nachgeschaltete metabolische Signalwege prägt, und trägt in endokrinen und epithelialen Kontexten zu nährstoffabhängigen Transkriptionsprogrammen bei. Eine veränderte Expression oder Funktion von SLC2A2 wurde mit einer gestörten Glukoseverwertung und Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Diabetes und verwandte Stoffwechselerkrankungen relevant sind, sowie mit transporterabhängigen Effekten auf die epitheliale Transportphysiologie. In humanen Zellmodellen wird die Perturbation von SLC2A2 häufig eingesetzt, um Kinetiken der Glukoseaufnahme, metabolische Flüsse und Nährstoffsensorik-Signalwege zu untersuchen.
Glucose Transporter Glut2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SLC2A2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SLC2A2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SLC2A2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SLC2A2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.